Hoe de hoeveelheid bacteriën Present Bereken

Een steriele entnaald wordt gebruikt om een kolonie in vloeibare cultuur te brengen halen . Hemera Technologieën / Photos.com / Getty Images

Wetenschappers gebruiken seriële verdunningen (een reeks van 1:10 verdunningen) naar de bevolkingsdichtheid van bacterieculturen berekenen.Wanneer een druppel kweek die een klein aantal bacteriën uitgeplaat en geïncubeerd elke cel theoretisch zal ver genoeg van andere cellen die het zijn eigen kolonie te vormen.(In werkelijkheid, sommige kolonies kunnen nakomelingen van twee nabijgelegen cellen, maar dit is zelden in verdund culturen en dus het aantal kolonies is een zeer goede schatting van het aantal cellen aanvankelijk overgebracht naar de plaat.) Omdat de bevolkingsdichtheidbekend dient diverse verdunningen worden gebruikt om te eindigen met een plaat met een geschikt aantal kolonies.

wat je nodig hebt

  • 6 reageerbuizen
  • 6 agarplaten
  • bacteriecultuur
  • Pipetten
  • 0,1 ml en 1 ml steriele pipet tips
  • vlam
  • L-vormige glazen staaf

serieverdunningen

  1. Label de zes reageerbuizen (elk 9 mlvan groeimedia) a

    ls 1 tot 6. Label de zes agarplaten zoals 1 tot 6. Gebruik een pipet en steriele 1 milliliter (ml) pipet tips om 1 ml bacteriecultuur overbrengen in de buis 1.

  2. Meng goed en overdracht1 ml van de tube 1 in de buis 2 met behulp van een pipet 1 ml en steriel gesorteerd.

  3. Herhaal stap 2 voor de resterende buizen, elke keer dat de overdracht van 1 ml van de meest recent gebruikte buis naar de volgende buis.

  4. Gebruik een pipet en steriele 0,1 ml tips om 0,1 ml te brengen van de buis 1 tot een agarplaat.Vlam een ​​L-vormige glasstaaf en gebruiken om de drop gelijkmatig over de plaat gespreid.Incubeer de plaat gedurende 48 uur bij een geschikte temperatuur voor de bacteriën wordt gebruikt.Verschillende soorten bacteriën hebben verschillende optimale groeitemperatuur.Als u de optimale groei van de temperatuur niet kunt vinden met behulp van referentiemateriaal, probeer incubatie van de platen bij 25 en 37 graden.

  5. Herhaal stap 4, elke keer dat de overdracht van vloeistof uit een andere reageerbuis op de bijbehorende plaat.

Bevolking Berekeningen

  1. Neem de zes platen en kies de een met 30 tot 200 geïsoleerde kolonies.

  2. Vermenigvuldig het aantal kolonies op de plaat met 10 om het aantal cellen te berekenen per ml van de cultuur van de verdunning tube gebruikt.

  3. Vermenigvuldig het nummer uit stap 2 met 10 ^ (nummerplaat) om het aantal cellen per ml van de oorspronkelijke cultuur te berekenen.De waarde van 10 ^ (kenteken) is de verdunningsfactor van de cultuur wordt gebruikt om Innoculate die plaat.

Tips & amp;Waarschuwingen

  • Inclusief alle benodigde voedingsstoffen in de agar platen.Auxotrofe bacteriën vereisen bepaalde aminozuren in aanvulling op de basis media ingrediënten.Verschillende auxotrofen hebben verschillende behoeften aan voedingsstoffen.Referentiemateriaal te raadplegen om uit te vinden welke aminozuren, indien van toepassing, uw bacteriën nodig.
  • Wacht één seconde tussen vlammende de glazen staaf en het te gebruiken, om te voorkomen dat de bacterie te branden.
  • Draag altijd laboratorium handschoenen bij het hanteren van bacteriën.
252
0
1
Middelbare School