Hoe te Nutrient Agar maken voor Petrischalen

Petri schaaltjes Jupiterimages / Comstock / Getty Images

Liquid voedingsstof bouillon wordt gebruikt om de cultuur bacteriën zoals Escherichia coli.Recepten voor deze bouillon variëren afhankelijk van de bacteriesoort en de aanwezigheid van genetische modificaties, bijvoorbeeld, resistentie tegen antibiotica.De bouillon kan worden vergroot door de toevoeging van agar, die de bacteriën in staat stelt om verschillende kolonies te vormen, terwijl in vloeibare kweek ze gewoon te verspreiden over de hele volume.Dit is een eenvoudige maar essentiële techniek voor geavanceerde methoden zoals genklonering of microbiologische bepalingen.Dit artikel wordt verondersteld dat standaard laboratorium Escherichia coli stammen worden gekweekt op Luria-bouillon (LB) agarplaten (of petrischalen).

wat je nodig hebt

  • 10 gram bacto-trypton
  • 5 gram gistextract
  • 5 gram NaCl
  • 1 milliliter 1NNaOH
  • 15 gram agar of agarose
  • Supplementen, bijvoorbeeldantibiotica, galactosiden
  • autoclaaf
  • Laboratorium-grade glaswerk
  • Verschillende mouwen van petrischaaltjes
  • laminaire stroming kap
  • Bunsenbrander
  • autoclaaf en hulpstoffen
  • Weegschalen en hulpstoffen

instructies

  1. Weeg 10 gram van bacteriële-grade trypton, 5 gram gistextract, 5 gram natriumchloride, 15 g agar of agarose en 1 ml 1 N natriumhydroxide.Meng deze met een volume gedestilleerd en geautoclaveerd steriel water tot 1 liter medium wordt verkregen.Autoclaaf de media in losjes afgesloten flessen of kolven gedurende 25 minuten.Laat afkoelen tot ongeveer 50 ° C voor het toevoegen van reagentia die worden vernietigd op een hoge temperatuur, zoals antibiotica of andere voedingssupplementen.

  2. Laat de autoclaaf media afkoelen tot 50 ° C en niet hoger dan 45 graden Celsius, terwijl de agar wordt in de verpakking voordat het kan worden gegoten.Verkrijgen steriele Petrischalen en giet genoeg om het gehele oppervlak van de plaat en ten minste de helft van de diepte.Vermijd overvulling van de platen bij voorkeur niet toestaan ​​dat de agar contact met de bovenrand van de schaal.Laat de platen stollen in een steriele omgeving (bijvoorbeeld onder een laminaire stroming kap) van het verlaten van de deksels en een hoek van de kap.

  3. Droog de platen.Hoewel de platen zodra ze vastgesteld kunnen worden gebruikt, wat vocht op het oppervlak van de agar, die voorkomen bacteriële kolonies hechten voldoende zijn.Daarom is het het beste om de platen drogen voordat enige bacteriën, bijvoorbeeld door ze te zitten bij kamertemperatuur gedurende enkele dagen of gedurende een half uur onder een laminaire stroming kap of een 37 graden Celsius incubator.

  4. Store de platen.Gedroogde platen moet ondersteboven (omgekeerde) op hun deksels worden gestapeld en keerden terug naar hun originele verpakking, geplakt gesloten en hetzij verpakt in folie ter bescherming tegen licht en in een geschikte container.Schrijf altijd de datum van de voorbereiding op de platen en vermijd het gebruik als de platen meer dan 2 maanden oud.

Tips & amp;Waarschuwingen

  • uitvoeren zoals veel van de bovenstaande stappen (bij voorkeur alle) mogelijk binnen een steriele omgeving (bijvoorbeeld onder een open vlam, of een laminaire stroming kap) naar de lucht bacteriële verontreinigingen te stoppen van het invoeren en groeien in de media.
42
0
1
College