Hoe te flowcytometrie resultaten Begrijp

Hoe te flowcytometrie resultaten Begrijp Stip RF / Polka Dot / Getty Images

Wetenschappers gebruiken flowcytometrie om onderscheid te maken tussen verschillende soorten cellen of microscopische organismen.Het is een instrument dat wordt gebruikt in vele toepassingen zoals medische diagnostische of forensische pathologie.Hoewel deze experimentele techniek is vrij eenvoudig te realiseren, de analyse van de complexe gegevens die door de flowcytometer is moeilijker vanwege de vele experimentele factoren en / of cytometer parameters.Als zodanig is het routine voor cytometrische data worden gevisualiseerd en met geavanceerde professionele programma's zoals CELLQuest of FlowJo geanalyseerd.Vertrouwdheid met flowcytometrie technieken, machines en software noodzakelijk om de door deze experimenten resultaten te begrijpen.

wat je nodig hebt

  • FlowJo of andere flowcytometrie data-analyse software
  • Ruwe data van flowcytometers
  • Flowcytometrie experimentele protocollen en machineinstellingen

Inzicht flowcytometrie gegevens

  • Verduidelijking van het doel van het experiment door te vragen: "Wat was de vraag of de hypothese wordt onderzocht?"Dit is vereist om de ruwe resultaten passende vorm en instellingen voor verdere analyse met behulp van statistische software cytometrie passen.Voeg welke veranderingen noodzakelijk zijn om het weergegeven relevante instellingen (bijvoorbeeld positieve cellen negatief poorten, fluorescentie intensiteit celpopulaties etc.) gegevens.

  • zoeken poorten.Cellen kunnen worden gegroepeerd of gewoon waargenomen geclusterd op een dichtheid perceel of contour diagram.De groepen hebben vaak gescheiden afhankelijk van hun identiteit.Als een groep vlekken zeer intens voor een bepaalde marker of antilichaam, wordt geconcludeerd dat de leden van die groep hebben de identiteit van de specifieke cel-type, dat dat marker uitdrukt.Het is gebruikelijk om cellen die positief zijn voor meer dan één van deze merkers te vinden, en deze cellen zijn gewoonlijk tussenproduct en aangeduid als "dubbel positief."

  • Kijk naar scattergraphs.De manier waarop de groepen cellen verspreid in een spreidingsdiagram is een indicatie van de grootte van de cellen.Cellen met een zeer grote of hoge verstrooit zijn meestal grote cellen;zij kunnen echter groot zijn omdat zij een hoog percentage van cytoplasma, of ze kunnen groot zijn omdat ze een zeer grote kern.Afhankelijk van de biologie onderzochte Dit zal natuurlijk variëren sterk tussen experimenten.

  • Kijk naar nummers.Stel plaatsen verschillende parameters weergegeven op een as (meestal de X-as) terwijl de tellingen op de Y-as.Dit geeft het percentage van het monster populatie die positief voor die specifieke parameter zijn als piek normaliter wordt waargenomen in een positief gekleurd monster dat afwezig in de negatieve controlemonster wordt.

  • Kijk naar multiple-parameter histogrammen.Door de X-as en de Y-as elk een andere parameter die werd onderzocht tijdens het experiment, is het mogelijk om een ​​beter begrip van de eigenschappen van het monster te krijgen.Bijvoorbeeld, door de X-as naar rode fluorescentie en de Y-as naar groene fluorescentie, quadrant-style poorten kunnen worden berekend voor de sample vier gebieden van een kwadrant die cellen aanwezig zijn vertonen en gekleurd voor rood of groenfluorescentie, beide kleuren, of helemaal geen.Hierdoor kan een heterogeen monster worden onderverdeeld in de onderdelen en overlappingen entiteiten en gekwantificeerd worden gevisualiseerd.

987
0
1
College