Hoe te Agarosegels Van Powder Make

Hoe te Agarosegels Van Powder Make Comstock Images / Comstock / Getty Images

Agarosegels zijn gemaakt door wetenschappers die werkzaam zijn in de moleculaire biologie laboratoria om DNA-fragmenten die worden gewijzigd tijdens experimenteel werk te bestuderen.De techniek van het maken agarosegels is een routine en basisvaardigheid die moet worden beheerst door alle onderzoekers omdat het de directe visualisatie van verschillende DNA maten voor verificatie en verdere genklonering projecten.Hoewel de bereiding van het gel niet moeilijk, zoals alle laboratoriumprocedures moet alleen gebeuren door een getrainde wetenschappelijke professional vanwege de risico biohazards.

wat je

  • Elektroforese agarose poeder
  • TAE of TBE elektroforesebuffer
  • Ethidiumbromide oplossing
  • Gel-casting trays nodig
  • Tape of gel lade clips
  • Gel kamt
  • Weegschalen en hulpstoffen
  • Ethanol
  • Laboratory doekjes
  • Persoonlijke beschermingsmiddelen

Voorbereiding van agarosegelen

  • Controleer of de gel-casting

    trays niet scheuren of iets dat kan leiden tot hete agarose te lekken te hebben.Reinig de trays schoon met 70% ethanol en laat ze drogen.De lade zal twee open einden en twee gesloten uiteinden.In sommige formaten, worden klemmen voorzien deze laden om de einden te sluiten, maar de meeste bakken moeten worden afgedicht door het plaatsen van stroken tape over deze onderdelen geopend.Druk hard en veilig, omdat deze weg zal uit de plastic bak te trekken en laat hete agarose te lekken de tape.

  • basis van de grootte van het DNA-fragment worden gescheiden en geanalyseerd, de geschikte percentage agarosegel die nodig zullen zijn.Bijvoorbeeld, een 1 procent (gewicht naar volume) agarosegel effectief voor de analyse van 0,5 tot 10 kilobase-size DNA segmenten.Hoe hoger het percentage (meer agarose), hoe kleiner de fragmenten die kunnen worden gescheiden.Routine experimenten zullen een bereik van 0,5 procent tot 2 procent agarose gebruiken.Voor een 1 procent agarosegel afgewogen 1 gram agarose poeder onder een zuurkast of een ander geschikt systeem.Breng deze zorgvuldig aan de gel voorbereiding gebied van het laboratorium.

  • In de juiste gel voorbereiding gebied, afmeten 100 milliliter elektroforese buffer.Dit moet op kamertemperatuur.Breng de agarose poeder in een warmte-proof kolf en giet in de gemeten volume van elektroforese buffer.Warm zachtjes het mengsel in een magnetron, maar niet toestaan ​​dat dit aan de kook, omdat de verdamping van de agarose percentage aanwezig zal veranderen.Zorg ervoor dat alle agarose is opgelost, wervelen om grondig te mengen, laat heel lichtjes afkoelen en afzien van 0,5 microgram per milliliter ethidiumbromide.Adem geen enkele damp omdat de longen en slijmvliezen irriteren.Bovendien hoeft de oplossing niet opwarmen na ethidiumbromide is toegevoegd.Swirl opnieuw en meng terwijl de oplossing nog warm genoeg is om te storten, afzien deze in de voorbereide gel lade.Merk op dat als een groot monstervolume, of een kleine concentratie DNA aanwezig is, een dikkere gel kan worden gemaakt.Echter, dunnere gels gemakkelijker te analyseren, omdat ze duidelijker zullen fotograferen.

  • Plaats de gel kammen om sleuven of putten te creëren voor de steekproef worden geladen.Laat dit afkoelen op kamertemperatuur gedurende enkele uren in een koelkast gedurende enkele minuten.In het laatste geval, wanneer de gel heeft ingesteld, moet worden geobserveerd op agarose kristallen.Meestal verdwijnt als de gel wordt gelaten om op te warmen tot kamertemperatuur met rust op een bank voor een paar minuten vóór gebruik.Verwijder voorzichtig de gel kammen om niet aan de gel scheuren of breken de putten.De agarose gel is nu klaar voor gebruik.Als het niet onmiddellijk wordt gebruikt, moet worden verpakt in cellofaan of opgeslagen in een plastic container in de koelkast om de gel uitdroogt of smelten.

Tips & amp;Waarschuwingen

  • De gebruikte reagentia zijn potentieel kankerverwekkende stoffen en moeten met de nodige zorg en bescherming worden behandeld.Als een fout is gemaakt tijdens de voorbereiding van de gel moet nooit worden opgewarmd, maar vernietigd, en een nieuwe gel voorbereid weer.
52
0
1
College