Hoe om bacteriegroei in Petrischalen Maatregel

Een wetenschapper analyseren van een kolonie in een petrischaal . PictureNet / Blend Images / Getty Images

Bacteriën worden gekweekt in petrischalen op een vast medium bekend als bacteriële agar, waarbij verhoogde, ronde kolonies vormen.De groei kan worden gemeten door eenvoudige waarneming van hoe dicht de kolonies en hoeveel aanwezig zijn evenwel meer kwantitatieve methoden omvatten het gebruik van een telkamer, of vaker, levensvatbare plaattellingen.Laatstgenoemde wordt meestal als het biedt ook kwalitatieve informatie gebruikt zoals het effect van verschillende groeiomstandigheden.

wat je nodig hebt

  • Verwatering media
  • Pipetten en tips
  • Tubes
  • Bacteriële cultuur media en agarplaten
  • Vortex
  • Bunsenbrander
  • Glass strooiers
  • 70 procent ethanol
  • Opzetten van een reeks buizen met seriële 01:10verdunningen van media.Bijvoorbeeld het opzetten van een rij van 10 buizen en voeg 10 microliter van het uitgangsmateriaal bacteriecultuur tot 90 microliter verdunning medium.Sluit het deksel van de buis stevig en vortex

    zodat een homogeen mengsel te verkrijgen.Overdracht 10 microliter van deze naar de volgende buis met 90 microliter verdunningsmiddel, enzovoort.Zorg ervoor dat elke buis wordt voorzien van de juiste verdunning, dwz 10 ^ 1, 10 ^ 2, enz

  • Doseer 10 microliter van de laatste verdunning (een plating factor 10 te maken) op de agar plaat.Met de verspreiding rand, verdelen de bacteriële oplossing over het gehele oppervlak van de agar plaat.Herhaal dit voor zoveel als nodig duplo echter duplicaten zijn meestal voldoende.Plaats het deksel en laat de agar platen drogen gedurende enkele minuten worden op een laboratoriumtafel onder een vlam, of in een incubator.Keer de platen op hun deksels, en label de platen.Plaats de platen in de incubator die moet worden ingesteld op de juiste temperatuur voor de bacteriestam.Laat groeien 12 tot 16 uur.

  • Kolonies moet zichtbaar zijn na 16 uur, maar sommige genetische modificaties kan langer (bijvoorbeeld kleur ontwikkeling) vergen.Wanneer kolonies worden nageleefd, nemen de platen uit en vind degenen die hebben tussen de 30 en 300 kolonies.Met behulp van een permanente marker, plaatst een punt op de bodem van de petrischaal (de zijde met de agar, niet het deksel) waarbij een kolonie zichtbaar door de agar en tellen.Herhaal dit totdat alle kolonies worden gemarkeerd en geteld.

  • De hoeveelheid bacteriën af te leiden in het uitgangsmateriaal kweek van dit experiment worden de formules:
    aantal getelde kolonies X verdunningsfactor (bijvoorbeeld 10 ^ 7 of 10 ^ 9 etc) X verdunningsfactor plateren (ie 10) = aantal kolonievormende eenheden (CFU) per milliliter kweek beginnen.

Resources

  • Truckee Meadows Community College: Bacteriële telt - Kwantitatieve Analyse van Microben
488
0
1
College