Hoe te PCR Sequencing Perform

Onderzoekers gebruiken PCR sequencing kleine monsters van DNA te bestuderen . Comstock / Comstock / Getty Images

In de vroege dagen van de DNA-analyse, was het van vitaal belang voor onderzoekers en rechercheurs om grote monsters van DNA voor hen om enige kans van de proppen komen met nuttige hebbenresultaten.Dat was voor polymerase chain reaction (PCR) sequencing ontwikkeld.PCR sequencing toegestaan ​​wetenschappers om genomische regio's te versterken voor analyse.Een 0,1 microliter - - Dankzij PCR sequencing kan een forensisch onderzoeker een mens met slechts een tiende van een miljoenste van een liter identiteit van zijn speeksel.

  • Heat het onbekende DNA zodat de gekoppelde strengen te scheiden en de enkelvoudige strengen kan combineren met DNA primers.

  • Meng de DNA template magnesiumchloride, DNA nucleotiden en een grote hoeveelheid DNA primers.Het grotere aantal primers zorgt voor de geïdentificeerde DNA-strengen combineren met primers en niet met elkaar.Koel het reactiemengsel zo enkelvoudige strengen combineren met de primer strengen.

  • toevoegen DNA polyme

    rase.DNA-polymerase is een enzym dat DNA-strengen kan lezen en te breiden door het inhaken nucleotiden samen, die kopieën van het eerste monster van niet-geïdentificeerde DNA ontstaat.

  • Voeg meer DNA-primers en nucleotiden en herhaalt de cyclus.Herhaal dit totdat je voldoende DNA.

Tips & amp;Waarschuwingen

  • De hoeveelheid DNA sjabloon die u nodig hebt om de sequentie van een PCR is afhankelijk van de grootte van de PCR-fragment.Bijvoorbeeld, een sjabloon 200 tot 500 basenparen vereist om 25 100 nanogram DNA-materiaal.
  • Voordat u een PCR sequencing te voeren, moet u bevestigen dat er DNA-materiaal in de steekproef met behulp van een ethidiumbromide plaattest.Deze methode zal alles behalve de kleinste monsters tonen.
  • Om de PCR sequencing visualiseren, plaatst het eindproduct in een gel-elektroforese apparaat.
  • Indien mogelijk, houdt de concentratie van niet-geïdentificeerde DNA in je steekproef zo ​​hoog mogelijk.Hierdoor wordt de kwaliteit en betrouwbaarheid van PCR sequencing resultaten verhogen.

Resources

  • Duke University: Behouden Primer Sequences voor PCR-amplificatie en Sequencing
411
0
1
Andere Business & Society