Stappen om Agarosegelelektroforese

Agarosegelelektroforese is een wetenschappelijke procedure gebruikt in onderzoek en diagnose projecten waarbij de studie van nucleïnezuren.Het maakt een wetenschapper of technicus scheiden geladen nucleïnezuur-moleculen, zoals DNA, op basis van hun omvang, en wordt gebruikt om de door het analyseren van experimenten zoals de polymerase kettingreactie.Het wordt routinematig gebruikt omdat het goedkoop uit te voeren, snel te verwerken en maakt winning van het nucleïnezuur geanalyseerd.

Werpt het Gel

  • Verzamel alle benodigde items en maak ze schoon met 70 procent ethanol.De items omvatten gel casting trays, afplakband, laboratorium-grade agarose, flessen of cilinders, loopt buffer (Tris-boraat-EDTA, TBE) bij 10X concentratie ethidiumbromide, het laden van kleurstof en het te analyseren monster.Ook voor zorgen dat je een gel elektroforese tank en stroombron.De agarose wordt bereid door afwegen van de geschikte hoeveelheid voor de grootte van DNA te analyseren, mengen deze met TBE buffer en smelten i

    n een magnetron.In het algemeen, een 1-2 procent oplossing voldoende voor de meeste maten bedekken van DNA bestudeerd in routine moleculaire biologie.Kleinere DNAs geconcentreerder gels nodig, terwijl grotere meer verdunde gels nodig.De agarose-oplossing wordt gemengd met ethidiumbromide, dat zal binden aan het nucleïnezuur tijdens de elektroforese procedure.Deze oplossing wordt gegoten in de gel casting lade een goed casting kam geplaatst, en het mengsel laat stollen.

laden en uitvoeren van de Gel

  • De gel wordt verwijderd uit de casting lade en ondergedompeld in een gel elektroforese tank met stromend buffer.De te analyseren monsters worden gemengd met beladingskleurstof en geladen in putjes in de gel door de kam.Een merker of ladder ook, de onderzoeker mogelijk maken de voortgang van de elektroforese kijken en bepalen de grootte van fragmenten later gegenereerd.Een elektrische stroom wordt vervolgens aangebracht op de gel, waarbij het monster dwingen te migreren van het ene uiteinde van de gel naar de andere.Tijdens dit proces, de nucleïnezuren in het monster te scheiden in fragmenten van verschillende grootte, met grotere moleculen verblijf dichter bij de bron en kleinere moleculen verplaatsen naar het andere uiteinde van het gel.

Analyseer de gel

  • Na de elektroforese is voltooid, wordt de gel uit de tank en op een UV transilluminator, die oplicht nucleïnezuur fragmenten die zijn gebonden aan fluorescerende ethidium bromide.Een foto van de genomen en de banden van nucleïnezuren kan worden gedimensioneerd volgens de afstand migreerde door de gel.De ladder wordt gescheiden in banden van bekende grootte eveneens, en kan worden gebruikt om de onderzoeker geleiden tijdens de analyse.

Resources

  • Oxford Laboratorium Technologie: agarosegelelectroforese - Protocol
977
0
0
Andere Hoger Onderwijs