Miten saada agaroosigeeleillä jauheesta

Miten saada agaroosigeeleillä jauheesta Comstock Images / Comstock / Getty Images

agaroosigeeleillä tehdään työskentelevät tutkijat molekyylibiologian laboratorioissa, jotta voidaan tutkia DNA-fragmenttien, joita on muokattu aikana kokeellista työtä.Tekniikka tehdä agaroosigeeleillä on rutiinia ja perus taito, joka on hallittava kaikkien tutkijoiden koska se mahdollistaa suoran visualisoinnin eri DNA kokoisia tarkastusta ja edelleen geenikloonaus hankkeita.Kun taas valmiste geelin ei ole vaikeaa, kuten kaikki laboratoriomenettelyt, olisi vain yrittänyt koulutettu tieteellinen ammatillinen koska biouhkia mukana.

mitä tarvitset

  • Elektroforeesi agaroosi jauhe
  • TAE tai TBE-elektroforeesin puskuria
  • etidiumbromidiliuoksessa
  • Gel-valu lokerot
  • Nauha tai geelin lokeron leikkeet
  • geeli kammat
  • vaa'at ja kulutustavarat
  • Etanoli
  • laboratorio pyyhkii
  • Henkilökohtaiset suojaimet

valmistus agaroosigeeleillä

  • Tarkista, että geeli-valu lokerot ei ole halkeamia tai mitään, voi aiheuttaa k

    uumia agaroosia vuotaa ulos.Puhdista lokerot pyyhkimällä ne 70% etanolilla ja anna niiden kuivua kunnolla.Tarjotin on kaksi avointa päätä ja kaksi suljetussa päättyy.Joissakin muodoissa, leikkeet saavat nämä lokerot sulkeaksesi päihin, mutta useimmat tarjottimet on tiivistettävä asettamalla teippipalan poikki näitä avoimia osia.Paina nauha alas kovaa ja turvallisesti, koska nämä vetää pois muovipakkaus ja anna kuuma agaroosia vuotaa ulos.

  • perusteella koko DNA-fragmentti voidaan erottaa ja analysoida, määrittää sopivan prosenttiosuuden agaroosigeelissä, joka vaaditaan.Esimerkiksi, 1 prosenttia (paino-tilavuus-) agaroosigeelissä ovat tehokkaita analysoitaessa 0,5-10 ke-koko DNA-segmenttejä.Suurempi osuus (eli enemmän agaroosi), sitä pienempi on fragmentit, jotka voidaan erottaa toisistaan.Rutiini kokeiluja käyttää 0,5 prosentista 2 prosenttiin agaroosia.Saat 1 prosentti agaroosigeelillä, punnitaan 1 gramma agaroosia jauhe alle kemiallinen vetokaapissa tai muulla järjestelmän.Se varovasti tämä geelivalmisteen alueen laboratoriossa.

  • Vuonna sopiva geelivalmisteen alue, mitata 100 ml elektroforeesin puskuria.Tämän tulisi olla huoneen lämpötilassa.Siirrä agaroosi jauhe tulenkestävällä pulloon ja kaada Mitattu tilavuus elektroforeesin puskuria.Varovasti lämmin seos mikroaaltouunissa, mutta eivät salli tämän kiehua, koska haihtuminen muuttuu agaroosin prosentuaalinen läsnä.Varmista, että kaikki agaroosi on liuennut, pyörittele Sekoita huolellisesti, anna jäähtyä hieman, sitten luopua 0,5 mikrogrammaa millilitrassa etidiumbromidia.Älä hengitä missään höyryn koska se ärsyttää keuhkoja ja limakalvokudosten.Lisäksi, eivät lämmitä jälkeen, kun liuos etidiumbromidia on lisätty.Pyöritä sekoittaa uudelleen ja kun ratkaisu on vielä tarpeeksi kuuma kaataa, vapauttaa tämä valmisteltuun geelin lokeroon.Huomaa, että jos suuri määrä näytettä, tai pieni pitoisuus DNA: ta on läsnä, paksumpi geeli voidaan tehdä.Kuitenkin, ohuempi geelit on helpompi analysoida, koska ne kuvata selvemmin.

  • Aseta geeli kammat luoda lähtö tai kaivoja näytteen lataamista.Sallia tämän jäähtyä huoneen lämpötilassa useita tunteja, tai jääkaapissa useita minuutteja.Jälkimmäisessä tapauksessa, kun geeli on asetettu, on todettava mistään agaroosia kiteitä.Yleensä nämä katoavat jos geeli jätetään lämmetä huoneen lämpötilaan lepää penkillä muutaman minuutin ennen käyttöä.Irrota varovasti geelin kammat jottei repiä geeli tai rikkoa kuoppiin.Agaroosigeelistä on nyt valmis käytettäväksi.Jos sitä ei käytetä välittömästi, se on kääritään sellofaaniin tai varastoidaan muoviastiassa jääkaapissa estää geelin kuivumisen tai sulaminen.

Vinkkejä & amp;Varoitukset

  • käytettävien reagenssien ovat mahdollisia karsinogeeneja ja sitä on käsiteltävä asianmukaista hoitoa ja suojelua.Jos teet virheen valmistelun aikana geelin, se ei saa lämmittää, mutta hävitettävä, ja uusi geeli valmistettu uudelleen.
956
0
1
College