Miten mitata bakteerien kasvua Petrimaljat

Tiedemies analysoidaansiirtomaa petrimaljaan . Picturenet / Blend Images / Getty Images

Bakteerit kasvatetaan petrimaljoissa kun kiinteä alusta tunnetaan bakteeri- agar, jossa esille, pyöreä pesäkkeitä muodostavat.Niiden kasvua voidaan mitata yksinkertainen havainto, kuinka tiheä niiden siirtomaita ovat ja kuinka monet ovat läsnä, mutta enemmän kvantitatiivisia menetelmiä ovat käyttö laskukammiossa tai useammin, elinkelpoinen maljalukumäärät.Jälkimmäistä käytetään useimmin, koska se tarjoaa myös laadullisia tietoja, kuten vaihtelun vaikutusta kasvuolosuhteissa.

mitä tarvitset

  • Laimennus median
  • Pipettejä ja vihjeitä
  • Putket
  • Bakteeri elatusaineet ja agarmaljoille,
  • Vortex-
  • bunsenpoltin
  • Lasi levittimet
  • 70 prosenttia etanolia
  • Määritä sarjan putkiin, jotka sisältävät sarja 1:10laimennokset Media.Esimerkiksi perustaa rivi 10 putkien ja lisätään 10 mikrolitraa alkaa bakteeriviljelmää 90 mikrolitraa laimennus välineellä.Sulki kannen putken tiukasti ja pyörteen kevyesti homogeenisen seoksen.Sii

    rtää 10 mikrolitraa tätä seuraavaan putkeen, joka sisälsi 90 mikrolitraa laimennus väliaineen, ja niin edelleen.Varmista jokainen putki on merkitty oikea laimennus, eli 10 ^ 1, 10 ^ 2 jne

  • Annostele 10 mikrolitraa viimeisestä laimennoksesta (tehdä pinnoitus kerroin 10) agarmaljalle.Käyttämällä leviäminen reuna, jakaa bakteerien liuoksen koko pinnan agar-maljalla.Toista tämä niin monta rinnakkaista kuin tarvitaan, mutta kaksoiskappaleet riittävät yleensä.Aseta kansi ja anna agarmaljoille kuivua useita minuutteja joko laboratoriopöydälle alla liekki tai inkubaattorissa.Kääntele levyt päälle niiden kannet, ja merkitä levyt.Aseta levyt yrityshautomo, jonka tulee asettaa sopivassa lämpötilassa bakteerikanta.Jätä kasvaa 12-16 tuntia.

  • siirtomaiden pitäisi näkyä 16 tunnin, mutta jotkut geneettiset muutokset saattavat edellyttää enää (esim väri kehitys).Kun pesäkkeet havaitaan, ota levyt ulos ja löytää ne, jotka ovat välillä 30 ja 300 pesäkettä.Käyttäen pysyvä merkki, aseta piste pohjalle petrimaljaan (puolella agar, ei kansi) missä siirtomaa näkyy läpi agar, ja laske sitä.Toista, kunnes kaikki pesäkkeet merkitty ja lasketaan.

  • johtamiseksi bakteerien määrää lähtöaineena kulttuurin tässä kokeessa, käyttämällä kaavaa:
    määrä pesäkkeiden X laimennuskerroin (esimerkiksi 10 ^ 7, tai 10 ^ 9 jne) x laimennuskerroin pinnoitus (eli 10) = lukumäärä pesäkkeitä muodostavien yksiköiden (CFU) millilitraa kohti lähtöviljelmää.

Resurssit

  • Truckee Meadows Community College: bakteerikanta - kvantitatiivinen analyysi mikrobit
800
0
1
College