Kuinka suorittaa PCR Sequencing

Tutkijat käyttää PCR sekvensointi tutkia pieniä näytteitä DNA . Comstock / Comstock / Getty Images

alkuaikoina DNA-analyysin, se oli tärkeää tutkijoille ja rikospaikalle tutkijat ovat suuria näytteitä DNA heillä olisi mitään mahdollisuuksia keksiä hyödyllisiätulokset.Se oli ennen kuin polymeraasiketjureaktiolla (PCR) sekvensointi on kehitetty.PCR sekvensointi saa tutkijat monistamaan genomialueiden analysoitavaksi.Kiitos PCR sekvensointi, oikeuslääketieteen tutkija voi tunnistaa ihminen on vain yksi kymmenesosa yksi miljoonasosa litra - 0,1 mikrolitran - hänen sylkeä.

  • Lämpö tuntematon DNA joten sen pariksi säikeiden erottamiseksi ja yhden säikeet voi yhdistää DNA-alukkeita.

  • Sekoita DNA-templaatin kanssa magnesiumkloridin, DNA: n nukleotidit, ja suuri määrä DNA-alukkeita.Suurempi määrä alukkeiden takaa tuntematon DNA-säikeet yhdistyvät alukkeilla ja ei toistensa kanssa.Jäähdytä reaktioseos niin yhden säikeet yhdistyvät pohjamaali säikeet.

  • Lisää DNA-polymeraasia.DNA-polymeraasi on entsyymi, joka voi lukea DNA-säikeet ja laajentaa niitä koukkaamalla

    nukleotidin yhdessä, mikä luo kopioita ensimmäisen näytteen tunnistamattomat DNA.

  • Lisää enemmän DNA-alukkeita ja nukleotideja ja sykli toistetaan.Toista kunnes sinulla on riittävästi DNA.

Vinkkejä & amp;Varoituksia

  • määrä DNA-templaatin sinun täytyy sekvensoida PCR riippuu koosta PCR-fragmentin.Esimerkiksi, malli on 200-500 emäsparia vaatii 25-100 nanogrammaa DNA-materiaalin.
  • Ennen suorittaa PCR sekvensointi, sinun on vahvistettava on DNA-materiaalin Kokeilutiliin käyttämällä etidiumbromidia levy testi.Tämä menetelmä näyttää kaikkein pienimpiä näytteitä.
  • visualisoimiseksi PCR-sekvensointi, aseta lopputuotteen geelielektroforeesilla laite.
  • mahdollisuuksien mukaan pitää pitoisuudet tunnistamattomat DNA Kokeilutiliin niin korkealle kuin mahdollista.Tämä lisää laatua ja luotettavuutta PCR-sekvensointi tuloksia.

Resurssit

  • Duke University: Konservoitavia Aluke sekvenssit PCR-monistaminen ja sekvensointi
985
0
1
Muut Business & Society