Vaiheet Agaroosigeelielektroforeesi

Agaroosigeelielektroforeesi on tieteellinen menettely käytetään tutkimus- ja diagnostisten hankkeiden tutkimus nukleiinihappojen.Sen avulla tiedemies tai teknikko erottamiseksi veloitetaan nukleiinihappoa molekyylejä, kuten DNA, niiden koon, ja sitä käytetään analysoida tuotteiden kokeiden avulla saatujen kuten polymeraasiketjureaktiota.Se on rutiininomaisesti käyttää, koska se on halpa suorittaa, nopea käsitellä ja mahdollistaa talteenotto nukleiinihapon analysoidaan.

Cast Gel

  • Kerää kaikki tarvittavat kohdat ja puhdista ne 70 prosenttia etanolia.Erät sisältävät geeli valu tarjottimia, maalarinteippiä, laboratorio-luokan agaroosia, pulloja tai sylinterit, käynnissä (Tris-boraatti-EDTA, TBE) 10X pitoisuus, etidiumbromidia, täyteväriä ja analysoitava näyte.Varmista myös, että sinulla on geelielektroforeesin säiliö ja virtalähteeseen.Agaroosi valmistetaan punnitsemalla sopiva määrä koon DNA analysoitavaa, sekoittaa tätä TBE-puskurissa ja sulattamalla sitä mikroaaltouunissa.Yleensä 1-2 prosentin ra

    tkaisu riittää kattamaan useimmat kokoisia DNA tutkittu rutiini molekyylibiologian.Pienemmät DNA: t vaativat enemmän keskittynyt geelit, kun taas suuremmat vaatii enemmän laimealla geelejä.Agaroosiliuos sekoitetaan etidiumbromidilla, joka sitoutuu nukleiinihappoon aikana elektroforeesin menettelyn.Tämä liuos kaadetaan geelin valu lokero, hyvin valu kampa on asetettu, ja seos jätetään kiinteytyä.

ladata ja suorittaa Gel

  • geeli irrotetaan valu tarjotin ja upotetaan geelielektroforeesilla säiliö, jossa ajopuskuria.Näytteenoton sekoitetaan täyteväriä ja ladataan kaivoja geelin luoma kampa.Markkeri tai tikkaiden on myös mukana, jotta tutkija katsella edistymistä elektroforeesin ja koon määrittämiseksi fragmenttien syntyy myöhemmin.Sähkövirta levitetään sitten geelin, joka pakottaa näytteen siirtyä toisesta päästä geelin muille.Tämän prosessin aikana, nukleiinihapot näytteen erotella fragmentteja erikokoisia, jossa suuremmat molekyylit pysyä lähempänä hyvin, ja pienemmät molekyylit liikkuvat kohti toinen pää geelin.

Analysoi Gel

  • Elektroforeesin jälkeen toimenpide on valmis, geeli poistetaan säiliöstä ja asetetaan UV-läpivalaisulaitteella, joka syttyy, nukleiinihappoa fragmentit, jotka ovat sidottu fluoresoivia etidiumbromidia.Valokuva tämä on otettu ja bändit nukleiinihappojen voidaan mitoittaa mukaan etäisyys siirtynyt geelin läpi.Tikkaat ovat jaettu bändit tunnettuja koot samoin, ja niitä voidaan käyttää ohjaamaan tutkijan analyysin aikana.

Resurssit

  • Oxford Laboratory Technology: Agaroosigeelielektroforeesi - pöytäkirja
71
0
0
Muu Higher Education