Kuidas teha agarsöödet Petri nõud

Petri tassid Jupiterimages / Comstocki / Getty Images

Liquid toitepuljongit kasutatakse kultuuri baktereid nagu Escherichia coli.Retseptid puljongiga sõltuvad bakteriliigid ja olemasolu geneetiliste modifikatsioonide, nt antibiootikumiresistentsuse.Puljong saab kindlustas lisades agar, mis võimaldab bakteritel moodustada eraldi kolooniad, arvestades vedelas kultuuri nad lihtsalt laiali kogu mahust.See on lihtne, kuid oluline tehnika arenenud meetodid nagu geeni kloonimise või mikrobioloogilisi analüüse.Käesolevas artiklis eeldatakse, et standardsete laboratoorsete Escherichia coli tüvesid on kultiveerida Luria puljong (LB) agariplaatidelt (või Petri tassi).

, mida te vajate

  • 10 grammi bakto-trüptoonis
  • 5 grammi pärmi ekstrakt
  • 5 grammi NaCl
  • 1 milliliitri 1NNaOH
  • 15 grammi agar või agaroos
  • täiendus, ntantibiootikumid, galactosides
  • Autoclave
  • Laboratoorseks klaasnõud
  • Mitmed varrukad Petri tasside
  • tõmbekappi
  • Bunseni põleti
  • Autoclave ja tarbekaubad
  • kaalude ja tarbekaubad

juhised

  1. kaalutakse 10 grammi bakterite hinne trüptooni 5 grammi pärmi ekstrakt, 5 grammi naatriumikloriidi, 15 grammi agar või agaroos, ja 1 milliliiter 1N naatriumhüdroksiidi.Segage need mahuga destilleeritakse ja autoklaavitud steriilset vett kuni 1 liitri lahuse saamiseni.Autoklaavige meedia lõdvalt korgiga pudelid või kolbides 25 minutit.Lastakse jahtuda umbes 50 kraadi Celsiuse järgi enne lisamist reaktiive, mis hävitatakse kõrge kuumus, näiteks antibiootikumide või muude toidulisandid.

  2. Laske autoklaavitud meedia jahtuda 50 kraadini Celsiuse järgi ja mitte alla 45 kraadi Celsiuse järgi, kuna agar panen oma konteiner, enne kui saab valada.Pöörduda steriilne Petri tassi ning vala piisav, et katta kogu pind plaadi ja vähemalt pooled selle sügavus.Vältida ülevalamiste plaadid ja soovitavalt ei luba agar ühendust ülaserva roog.Laske plaadid tahkuma steriilses keskkonnas (nt laminaarõhuvoolus hood), jättes kaaned maha ja nurgas kapoti.

  3. Plaate kuivatatakse.Kuigi plaate võib kasutada niipea, kui need on esitatud mõned niiskumist esineda pinnal agar, mis takistavad bakterikolooniate kleepumine piisavalt.Seetõttu on parem kuivada plaate enne, kui kohaldatakse bakterid, näiteks jättes nad istuda toatemperatuuril mõne päeva või pool tundi laminaarõhuvoolus hood või 37 kraadi Celsiuse inkubaatoris.

  4. Store plaadid.Kuivatatud plaadid tuleks kuhjata tagurpidi (tagurpidi) oma kaaned ja tagastatakse originaalpakendis, teibitud kinni ja kas pakitud kilesse, valguse eest kaitstult või konteinerisse.Alati kirjutada valmistamise kuupäev taldrikutele ja vältige kui plaadid on rohkem kui 2 kuud vana.

Tips & amp;Hoiatused

  • Teostada nii palju ülaltoodut (soovitavalt kõik) kui võimalik steriilses keskkonnas (nt all lahtise leegiga või tõmbekappi) peatada õhus bakterite saasteainete sattumist ja kasvav meedias.
919
0
1
Kolledž