Kuidas teha Agaroosgeelid From Powder

Kuidas teha Agaroosgeelid From Powder Comstocki Images / Comstocki / Getty Images

Agaroosgeelid tehakse töötavate teadlaste molekulaarbioloogia laborites, et uurida DNA fragmente, mis ajal muuta eksperimentaalsed tööd.Tehnika tegemise agaroosgeelidelt on rutiinsed ja põhioskust mida tuleb masteroitu kõik teadlased, sest see võimaldab otsest visualiseerimine erinevate DNA suurused kontrollimiseks ja veelgi geeni kloonimisprojektides.Kuigi valmistamiseks geeli ei ole raske, nagu kõik laborimenetlused, see peaks olema üksnes üritanud väljaõppinud teaduslikud professionaalse tõttu bioloogilised ohud kaasatud.

, mida te vajate

  • Electrophoresis agaroos pulber
  • TAE või puukentsefaliidi elektroforeesi puhver
  • etiidiumbromiid lahendus
  • Gel-casting alused
  • Tape või geeli salve klippe
  • Gel kammid
  • kaalude ja tarbekaubad
  • Etanool
  • Laboratory purgis
  • Isikukaitsevahendid

ettevalmistamine agaroosigeelidel

  • Kontrollige, et geel-casting plaate ei ole pragusid või midagi, mis võib põhjusta

    da kuuma agaroos lekkida.Puhastage plaate, pühkides neid 70% etanooli ja võimaldab neil kuivada.Sahtel on kaks otsad ja kaks suletud otsad.Mõnel formaate, klambrid on varustatud neid plaate, et sulgeda otsad, kuid enamik plaate tuleb sulgeda pannes ribadeks lint üle need avatud osi.Vajutage lindi kõvasti ja turvaliselt, sest neid tõmbab eemale Plastaluse ja lubavad sooja agaroos lekkida.

  • Põhineb suurus DNA fragmendi võimalik eraldada ja analüüsida, määrata sobivad protsendid agaroosgeelil, mis on vajalikud.Näiteks 1 protsenti (kaal ja ruumala) agaroosgeelil on tõhus analüüsimiseks 0,5-10 kilobase-size DNA segmendid.Mida kõrgem protsent (st rohkem agaroos), seda väiksem on fragmendid, mis võivad olla eraldatud.Rutiinieksperimentides kasutab vahemikus 0,5 protsenti kuni 2 protsenti agaroos.Sest 1 protsenti agaroosgeel, Kaalutakse 1 gramm agaroos pulbri all keemilised tõmbekapis või muu Hoidla.Ettevaatlikult viiakse see siia geeli valmistamise valdkonnas laboris.

  • vastavasse geeli valmistamise alal, mõõdetakse 100 milliliitrit elektroforeesi puhvri.See peaks olema toatemperatuuril.Transfer agaroos pulbrit soojapidav kolbi ja vala mõõta mahu elektroforeesi puhvri.Soojendage segu mikrolaineahjus kuid ei võimalda seda keeta, sest aurumine muudab agaroos protsendi kohal.Veenduge, et kõik agaroos on lahustunud, õrnalt segada hoolikalt, lastakse jahtuda veidi, siis loobuda 0,5 mikrogrammi milliliitris Etiidiumbromiidi.Mitte hingata igal auru, sest see ärritab kopse ja limaskestad.Lisaks ei taassoojendamiseks lahust pärast etiidiumbromiidis on lisatud.Pöörata segada uuesti ning siis, kui lahendus on veel piisavalt kuum, et valada, loobuda sellest ettevalmistatud geel salve.Pange tähele, et juhul, kui suur maht proovi, või väike kontsentratsioon DNA esineb, paksem geeli võimalik teha.Kuid õhem geelid on lihtsam analüüsida sest nad pildistada selgemalt.

  • Sisestage geel kammid luua pilud või kaevude jaoks proovi koormatud.Luba sellel jahtuda toatemperatuuril mitu tundi või külmikus mitu minutit.Viimasel juhul, kui geel on seadistatud, siis tuleb märkida iga agaroos kristallid.Tavaliselt need kaovad, kui geeli lastakse soojeneda toatemperatuurile puhkavate pingil mõneks minutiks enne kasutamist.Ettevaatlikult eemaldatakse geel kammid, et mitte pisar geeli või murda auku.Agaroosgeel on nüüd kasutamiseks valmis.Kui see ei ole koheselt kasutatud, siis tuleb pakitud tsellofaani või ladustatakse plastanumas külmkapis vältimiseks geeli kuivamist või sulatamisel.

Tips & amp;Hoiatused

  • kasutatavad reagendid on potentsiaali kantserogeenid ja seetõttu tuleb olla asjakohane hoolt ja kaitset.Kui viga on ettevalmistuse käigus tehtud geeli, seda ei tohi kuumutatakse, kuid kõrvaldatud ning uue geeli uuesti valmistada.
931
0
1
Kolledž