Kuidas mõõta bakterite kasvu Petri tassides

Teadlane analüüsides koloonia Petri tassis . Picturenet / Blend Images / Getty Images

Bakterid kasvatatakse Petri tassid üles tugeva keskmise tuntud bakteri agar, kus tõstatati, ümmarguse kolooniaid moodustavad.Nende kasv saab mõõta lihtne tähelepanek, kuidas tihe oma kolooniad on ning kui palju leidub siiski rohkem kvantitatiivseid meetodeid, kui kasutatakse lugedes kambris, või sagedamini, elujõuline bakterite arvu.Viimast kasutatakse kõige sagedamini kuna see annab ka kvalitatiivseid andmeid nagu mõju erineva kasvutingimustes.

, mida te vajate

  • lahjendamine meedia
  • Pipetid ja nõuanded
  • torud
  • Bakterikultuuri meedia ja agariplaatidelt
  • Vortex
  • Bunseni põleti
  • Klaas laotur
  • 70 protsenti etanooli
  • Luua seeria torud, mis sisaldab seerianumber 01:10lahjendused meedia.Näiteks luua järjest 10 tuubi ja lisada 10 mikroliitris alates bakterikultuur 90 mikroliitris lahjendamiskeskkonda.Sulgeda kaas tuub korralikult ja keerise õrnalt, et saada ühtlane segu.Transfer 10 mikroliitris käesoleva järgmis

    ele tuubi, mis sisaldas 90 ui lahjendamiskeskkonda, ja nii edasi.Veendu, et kõik toru on märgistatud õige lahjendamise, st 10 ^ 1, 10 ^ 2 jne

  • jaotada 10 mikroliitris viimase lahjendamist (teha plaadistus 10 korda) peale agarplaadile.Kasutades levib serva, levitada bakteriaalse lahust kogu pinna agariplaadile.Korrake seda nii palju korduses kui vaja, aga dubleerib on tavaliselt piisav.Kaas ja lase agariplaatidelt kuivada mitu minutit kas labori pink all leek või inkubaatoris.Teistpidi plaate kaaned ja märgistavad plaadid.Asetage plaadid inkubaatorisse kus tuleks valida sobivale temperatuurile jaoks bakteritüvi.Lastakse kasvada 12 kuni 16 tunni jooksul.

  • kolooniad peaks olema nähtav pärast 16 tundi, aga mõned geneetilised modifikatsioonid võivad vajada pikemat (nt värvi areng).Kui kolooniad kinni võtta plaadid välja ja leida need, mis on vahemikus 30 kuni 300 kolooniat.Kasutades püsiva marker, asetage täpike Petri tassi (poolses agar, mitte kaas) kui koloonia on nähtav läbi agar ja loota seda.Korda, kuni kõik kolooniad on tähistatud ja loendatakse.

  • tuletamiseks kogus baktereid alustades kultuuri Selles katses kasutatakse järgmist valemit:
    loendatud kolooniate X lahjendustegur (nt 10 ^ 7 või 10 ^ 9 jne) X lahjendusteguri plaadistus (st 10) = Kolooniaid moodustavate osakeste arv (CFU) milliliitri algab kultuurist.

Resources

  • Truckee Meadows Community College: bakterite arv - kvantitatiivne analüüs Mikroobid
220
0
1
Kolledž