Kuidas teha PCR sekveneerimine

Uurijad kasutada PCR sekveneerimine uurida väikese proovi DNA . Comstocki / Comstocki / Getty Images

algusaegadel DNA analüüsi, see oli oluline, teadlased ja sündmuskohaekspertide on suured proovid DNA neil mingit võimalust tulemas kasulikTulemused.See oli enne polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) sekveneerimise töötati.PCR sekveneerimine lubatud teadlased võimendamiseks genoomi piirkondades analüüsiks.Tänu PCR sekveneerimine, kohtuekspertiisi uurija võib tuvastada inimene, kel vaid üks kümnendik ühest-miljondik liiter - 0,1 mikroliitriste - tema sülg.

  • Heat tundmatu DNA nii oma paaris haru eraldi ja üheahelalisteks saab kombineerida DNA krundid.

  • Sega DNA malli magneesiumkloriidi, DNA nukleotiidi ja suurel hulgal DNA praimerid.Mida suurem arv praimerid tagab tundmatu DNA ahelate kombineeruvad praimerid ja mitte üksteisega.Jahutage reaktsioonisegu nii üheahelalisteks kombineeruvad praimeri suunda.

  • Lisa DNA polümeraasi.DNA polümeraasi on ensüüm, mis suudab lugeda DNA ahelate ja laiendada nende pannes nukleotiidi koos, mis loob koopiad esimeses proovis

    tundmatu DNA.

  • Lisa rohkem DNA praimerid ja nukleotiidid ja korrata tsüklit.Korda, kuni teil on piisavalt DNA.

Tips & amp;Hoiatused

  • DNA kogus malli peate järjestada PCR sõltub suurusest PCR fragmendi.Näiteks malli 200 kuni 500 aluspaari nõuab 25-100 nanogrammi DNA materjali.
  • Enne sooritate PCR sekveneerimine, siis tuleb kinnitada on DNA materjali oma proovi kasutades etiidiumbromiidis plaat test.See meetod näitab kõiki kuid väikseim proovides.
  • visualiseerimiseks PCR sekveneerimine, asetage lõpptootes geelelektroforeesiks aparaadid.
  • vähegi võimalik, hoida kontsentratsioon identifitseerimatute DNA oma proovi nii kõrgele kui võimalik.See suurendab kvaliteeti ja usaldusväärsust oma PCR sekveneerimine tulemusi.

Resources

  • Duke University: konserveerunud praimerjärjestused PCR amplifikatsioon ja järjestamine
738
0
1
Muu Äri Ja ühiskond