Sammud agarooselektroforeesiga

agaroosgeelelektroforeesil on teaduslik menetlus kasutatakse teadusuuringute ja diagnostika projekte, mis hõlmavad uuring nukleiinhapped.See võimaldab teadlane või tehniku ​​eristamiseks on laetud nukleiinhapete molekule, näiteks DNA, vastavalt nende suurusele ja analüüsiks kasutatakse genereeritud toodete eksperimendid nagu polümeraasi ahelreaktsiooni.Seda kasutatakse tavaliselt, sest see on odav teha, kiire töötlemine ja võimaldab taastamise nukleiinhappe analüüsitakse.

Heitke Gel

  • koguda kõik vajalikud esemed ja puhastada neid 70 protsenti etanooli.Kirjed sisaldavad geel casting plaate, kleeplinti, labori-klass agaroos, kolvid või silindrid, voolutuspuhvrit (Tris-boraadil EDTA, puukentsefaliidi) 10X kontsentratsioon, etiidiumbromiidis, värvainet ja analüüsitavat proovi.Samuti tagada, et teil on geelelektroforeesiks tank ja toiteallikas.Agaroos valmistatakse kaalumist sobiva koguse suurusest DNA analüüsitav, segades seda puukentsefaliidi puhver ja sulamine seda mikrolaineahjus.Üldiselt 1-2 pro

    tsenti lahendus on piisav, et katta kõige suurused DNA uuritud rutiinse molekulaarbioloogia.Väiksemad DNAd nõuab rohkem kontsentreeritud geelid, samas suuremad nõuab rohkem lahjendatud geelid.Agaroos lahust segatakse etiidiumbromiidis, mis seondub nukleiinhappe ajal elektroforeesi käigus.See lahus valatakse geeli casting salve, hästi casting kamm on sisestatud, ja lastakse tahkuda.

Load ja käivitada Gel

  • Geel eemaldatud casting salve ja uputatud geelelektroforeesiks sisaldav mahuti voolutuspuhvrit.Proovid tuleb analüüsida segatakse värvainet ning laaditakse kaevud geelis poolt loodud kamm.Marker või redel on ka, et võimaldada uurija progressi vaadata elektroforeesi ja suuruse kindlakstegemiseks fragmendid hiljem.Elektrivool Seejärel kantakse geeli, mis sunnib proovi rännata ühest otsast geeli teisele.Selle protsessi käigus nukleiinhapped proovis eraldamiseks fragmentideks erineva suurusega, suuremate molekulide viibivate lähemale kaevu ning väiksemate molekulide liigub teine ​​ots geelist.

Analüüsige Gel

  • Pärast elektroforeesi protseduur on lõppenud, geel eemaldatakse tank ja asetada UV läbivalgusti, mis süttib nukleiinhapete fragmente, mis on seotud päevavalgus etiidiumbromiidis.Foto, kus see on võtnud ja ansamblid nukleiinhapete saab mille suurus sõltub kaugus rännanud läbi geeli.Redeli siis on lahutada bändid tuntud suurused samuti, ja saab kasutada, et suunata uurija analüüsi ajal.

Resources

  • Oxford Laboratory Technology: agaroosgeelelektroforeesil - protokolli
49
0
0
Muud Higher Education