Sådan Beregn mængden af ​​bakterier Present

En steril podenål bruges til at vælge en koloni at sætte i flydende kultur . Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images

Forskere bruger serielle fortyndinger (en serie af 1:10 fortyndinger) for at beregne befolkningstætheden i bakteriekulturer.Når en dråbe kultur indeholdende et lille antal bakterier udplades og inkuberes, hver celle teoretisk vil være langt nok væk fra andre celler, som det vil danne sin egen koloni.(I virkeligheden kan nogle kolonier være efterkommere af to nærliggende celler, men det er sjældent i fortyndede kulturer, og så antallet af kolonier er en meget god estimat af antallet af celler oprindeligt overført til pladen.) Fordi befolkningstæthed erukendt, skal en række fortyndinger anvendes med henblik på at ende med en plade med et passende antal kolonier.

hvad du har brug

  • 6 reagensglas
  • 6 agarplader
  • Bakteriel kultur
  • pipette
  • 0,1 ml og 1 ml sterilt pipettespidser
  • Flame
  • L-formet glasstav

seriefortyndinger

  1. Label de seks reagensglas (der hver indeholder 9 mlaf vækstmedier) som 1 til 6. Label d

    e seks agarplader som 1 til 6. Brug en pipette og sterile 1 milliliter (ml) pipettespidser til at overføre 1 ml bakteriekultur i røret 1.

  2. Bland godt og overførsel1 ml fra rør 1 ind i røret 2 ved hjælp af en pipette og sterile 1 ml tips.

  3. Gentag trin 2 for de resterende rør, hver gang at overføre 1 ml fra den senest anvendte rør til næste rør.

  4. Brug en pipette og sterile 0,1 ml tips til at overføre 0,1 ml fra røret 1 til en agarplade.Flame en L-formet glasstav, og bruge den til at sprede drop jævnt omkring pladen.Inkubér pladen i 48 timer ved en passende temperatur for bakterierne bliver brugt.Forskellige typer af bakterier har forskellige optimale temperaturer for vækst.Hvis du ikke kan finde den optimale væksttemperatur hjælp referencemateriale, prøv inkubere pladerne ved 25 og 37 grader.

  5. Gentag trin 4, hver gang overføre væske fra en anden reagensglas på dens tilsvarende plade.

Befolkning Beregninger

  1. Overhold de seks plader og vælge den med 30 til 200 isolerede kolonier.

  2. Multiplicer antallet af kolonier på pladen med 10 for at beregne antallet af celler pr ml kultur fra fortyndingen rør anvendes.

  3. Multiplicer antallet fra trin 2 ved 10 ^ (plade nummer) for at beregne antallet af celler pr ml oprindelig kultur.Værdien af ​​10 ^ (plade nummer) er fortyndingsfaktoren af ​​kulturen bruges til inokulering denne plade.

Tips & amp;Advarsler

  • Medtag alle de nødvendige næringsstoffer i de agarplader.Auxotrofe bakterier kræver visse aminosyrer i tillæg til de basale medier ingredienser.Forskellige auxotrofer har forskellige krav næringsstof.Consult referencemateriale for at finde ud af, hvilke aminosyrer, der eventuelt skal din bakterier.
  • Vent et sekund mellem flammende glas stang og bruger den, så for ikke at brænde bakterier.
  • Bær altid laboratorium handsker ved håndtering bakterier.
421
0
1
Gymnasium