Hvordan laver Næringsagar for petriskåle

petriskåle Jupiterimages / Comstock / Getty Images

Flydende næringsstof bouillon bruges til kultur bakterier såsom Escherichia coli.Opskrifter til denne bouillon varierer afhængigt af de bakteriearter og tilstedeværelsen af ​​genetiske modifikationer, f.eks antibiotikaresistens.Bouillonen kan størknes ved at tilsætte agar, hvilket gør det muligt for bakterier til at danne særskilte kolonier, hvorimod i flydende kultur de simpelthen sprede hele volumenet.Dette er en grundlæggende, men afgørende teknik til avancerede metoder, såsom genkloning eller mikrobiologiske assays.Denne artikel antager, at Standardlaboratorieudstyr Escherichia coli-stammer, der skal dyrkes på Luria-bouillon (LB) agarplader (eller petriskåle).

hvad du har brug

  • 10 gram bactotrypton
  • 5 gram gærekstrakt
  • 5 gram NaCl
  • 1 milliliter 1NNaOH
  • 15 gram agar eller agarose
  • Kosttilskud, f.eksantibiotika, galactosider
  • Autoklave
  • Laboratorium kvalitet glasvarer
  • Adskillige ærmer af petriskåle
  • Laminar flow hætte
  • bunsenbrænder
  • Autoklave og forbrugsstoffer
  • vægte og hjælpematerialer

Instruktioner

  1. afvejes 10 g af bakteriel-grade trypton, 5 gram gærekstrakt, 5 gram natriumchlorid, 15 g agar eller agarose, og 1 milliliter 1 N natriumhydroxid.Bland disse med et volumen destilleret og autoklaveres sterilt vand, indtil 1 liter medium opnås.Autoklaver medierne i løst udjævnede flasker eller kolber i 25 minutter.Lad det køle af til ca. 50 grader, før du tilføjer reagenser, der vil blive ødelagt ved høj varme, såsom antibiotika eller andre kosttilskud.

  2. Lad autoklaverede medier til at afkøle til 50 grader Celsius og ikke lavere end 45 grader Celsius, som agaren vil sætte i beholderen, før den kan hældes.Opnå sterile petriskåle og hæld nok til at dække hele overfladearealet af pladen og mindst halvdelen af ​​sin dybde.Undgå overfyldning pladerne og fortrinsvis ikke tillader agaren at kontakte den øverste kant af skålen.Tillad pladerne til at størkne i et sterilt miljø (for eksempel under en laminar flow hætte) ved at lade lågene fra og til et hjørne af hætten.

  3. Tør pladerne.Skønt plader kan bruges, så snart de er sat, vil nogle fugt være til stede på overfladen af ​​agaren, hvilket vil forhindre bakteriekolonier klæbe tilstrækkeligt.Derfor er det bedst at tørre pladerne før påføring eventuelle bakterier, for eksempel ved at lade dem sidde ved stuetemperatur i et par dage eller en halv time under en laminær strømning eller i en 37 graders Celsius inkubator.

  4. Store pladerne.Tørrede plader skal stables på hovedet (omvendt) på deres låg og vendte tilbage til deres oprindelige emballage, tapede lukket og enten pakket ind i folie for at beskytte mod lys eller i en egnet beholder.Skriver altid datoen for forberedelse på pladerne, og undgå at bruge, hvis pladerne er mere end 2 måneder gammel.

Tips & amp;Advarsler

  • Udfør så mange af de ovennævnte trin (helst alle) som muligt inden for et sterilt miljø (f.eks under en åben flamme, eller en laminar flow hætte) for at stoppe luftbårne bakterielle forureninger i at komme ind og vokser i medierne.
695
0
1
Kollegium