Hvordan laver agarosegeler fra Powder

Hvordan laver agarosegeler fra Powder Comstock Images / Comstock / Getty Images

Agarosegeler er lavet af forskere, der arbejder i molekylærbiologiske laboratorier for at studere fragmenter af DNA, som ændres i løbet af eksperimentelt arbejde.Teknikken med at gøre agarosegeler er en rutine og grundlæggende færdighed, der skal beherskes af alle forskere, fordi det giver mulighed for direkte visualisering af forskellige DNA størrelser for verifikation og yderligere gen kloning projekter.Mens forberedelsen af ​​gelen er ikke svært, ligesom alle laboratorieprocedurer, bør det kun forsøges af en uddannet videnskabeligt professionel på grund af de involverede biologiske risici.

hvad du har brug

  • Elektroforese agarosepulver
  • TAE eller TBE elektroforese buffer
  • ethidiumbromidopløsning
  • Gel-casting bakker
  • Tape eller gel bakke klip
  • gelkammene
  • vægte og hjælpematerialer
  • Ethanol
  • Laboratory klude
  • Personlige værnemidler

Udarbejdelse af agarosegeler

  • Kontroller at gel-casting bakke

    r ikke har revner eller noget, der kan forårsage varme agarose til at sive ud.Rens bakkerne ved aftørring med 70% ethanol og lad dem tørre grundigt.Bakken vil have to åbne ender og to forseglede ender.I nogle formater, er klip forsynet med disse bakker for at lukke enderne, men de fleste bakker skal forsegles ved at placere strimler af tape på tværs af disse åbne dele.Tryk tapen hårdt ned og sikkert fordi disse vil trække sig væk fra plastbakken og tillade varm agarose til at sive ud.

  • Baseret på størrelsen af ​​DNA-fragmentet, der skal separeres og analyseres, fastlægge passende procentdel agarose gel, der vil være påkrævet.For eksempel vil en 1 procent (vægt-til-volumen) agarosegel være effektive til analyse af 0,5 til 10 kilobase-størrelse DNA-segmenter.Jo højere procentdel (dvs. mere agarose), jo mindre fragmenterne, der kan adskilles.Rutineforsøg vil bruge en række 0,5 procent til 2 procent agarose.For en 1 procent agarose gel, afvejes 1 g agarosepulver i stinkskab eller andet indeslutningssystem.Overføre omhyggeligt dette til gelen forberedelse område af laboratoriet.

  • i de relevante gel forberedelse område, udmåle 100 milliliter elektroforese buffer.Dette bør være ved stuetemperatur.Overfør agarosepulver i et ildfast kolbe og hæld i det målte volumen elektroforese buffer.Forsigtigt opvarme blandingen i en mikrobølgeovn, men ikke tillader dette at koge fordi fordampning vil ændre agarose procentvise stede.Sørg for, at alle agarosen er opløst, hvirvle at blande grundigt, lad den køle meget svagt, så dispensere 0,5 mikrogram per milliliter ethidiumbromid.Undgå indånding i nogen dampe fordi dette vil irritere lungerne og slimhinder væv.Hertil kommer, at ikke genopvarme opløsningen efter ethidiumbromid er blevet tilføjet.Swirl at blande igen og derefter, mens løsningen er stadig varmt nok til at hælde, dispensere dette i den klargjorte gel bakken.Bemærk, at hvis et stort prøvevolumen, eller en lille koncentration af DNA er til stede, kan en tykkere gel gøres.Dog vil tyndere geler være lettere at analysere, fordi de vil fotografere mere klart.

  • Indsæt gelkammene at skabe slots eller brønde for prøven, der skal lastes.Tillad denne til afkøling ved stuetemperatur i adskillige timer, eller i et køleskab i flere minutter.I sidstnævnte tilfælde, når gelen er indstillet, skal det bemærkes for eventuelle agarose krystaller.Normalt disse forsvinder, hvis gelen er efterladt for at opvarme til stuetemperatur ved at hvile på en bænk i et par minutter inden brug.Fjern forsigtigt gelkammene for ikke at rive gel eller bryde brøndene.Agarosegelen er nu klar til brug.Hvis den ikke anvendes straks, skal det være indpakket i cellofan eller opbevares i en plastbeholder i et køleskab for at forhindre gelen i at tørre ud eller smelter.

Tips & amp;Advarsler

  • De anvendte reagenser er potentielle kræftfremkaldende stoffer og skal håndteres med passende pleje og beskyttelse.Hvis en fejl er foretaget i forbindelse med udarbejdelsen af ​​gelen, må det aldrig blive genopvarmet, men bortskaffes, og en ny gel forberedt igen.
70
0
1
Kollegium