Sådan måler bakterievækst i petriskåle

En videnskabsmand analysere en koloni i en petriskål . Picturenet / Blend Images / Getty Images

Bakterier dyrkes i petriskåle på et fast medium kendt som bakteriel agar, hvor hævet, cirkulære kolonier dannes.Deres vækst kan måles ved simpel observation af, hvordan deres tætte kolonier, og hvor mange er til stede, men mere kvantitative metoder omfatter anvendelse af et tællekammer, eller oftere, levedygtige pladetællinger.Sidstnævnte anvendes hyppigst som det giver også kvalitative oplysninger såsom virkningen af ​​varierende vækstbetingelser.

hvad du har brug

  • Fortynding medier
  • Pipetter og spidser
  • Tubes
  • bakteriekultur medier og agarplader
  • Vortex
  • bunsenbrænder
  • Glas spredere
  • 70 procent ethanol
  • Opsæt en serie af rør indeholdende serielle 01:10fortyndinger af medier.For eksempel nedsat en række af 10 rør og tilsæt 10 mikroliter af den begyndende bakteriekultur til 90 mikroliter fortynding medium.Luk låget af røret stramt og vortex forsigtigt for at opnå en homogen blanding.Overfør 10 mikroliter

    af dette til den næste rør indeholdende 90 mikroliter fortynding medium, og så videre.Sikre hvert rør er mærket med den korrekte fortynding, dvs. 10 ^ 1, 10 ^ 2 osv

  • Dispensér 10 mikroliter af den sidste fortynding (for at gøre en plating faktor 10) på agarplade.Ved hjælp af spredning kant, distribuere den bakterielle opløsning over hele overfladen af ​​agarplade.Gentag dette for så mange gentagelser som er nødvendige, men dubletter er normalt tilstrækkelig.Sæt låget og lad agarpladerne tørre i adskillige minutter enten på en bænk under laboratorie en flamme eller i en inkubator.Vend pladerne på deres låg, og mærke pladerne.Placer pladerne i inkubatoren, som skal sættes til den passende temperatur for bakteriestamme.Efterlad at vokse i 12 til 16 timer.

  • Kolonier skal være synlig efter 16 timer, dog kan nogle genetiske ændringer kræver længere (f.eks farveudvikling).Når kolonier observeres, tage pladerne ud og finde dem, der har mellem 30 og 300 kolonier.Ved hjælp af en permanent markør, placere en prik på bunden af ​​petriskålen (siden med agar, ikke låget), hvor en koloni er synlig gennem agaren, og tælle det.Gentag indtil alle kolonierne er markeret og tælles.

  • At udlede mængden af ​​bakterier i start kultur for dette eksperiment, bruge formlen:
    Antal kolonier optalt X fortyndingsfaktor (f.eks 10 ^ 7 eller 10 ^ 9 osv) X fortyndingsfaktor for plating (dvs. 10) = Antal kolonidannende enheder (CFU) per milliliter for at starte kulturen.

Ressourcer

  • Truckee Meadows Community College: kimtal - kvantitativ analyse af Mikrober
829
0
1
Kollegium