Sådan udføres PCR -sekventering

Efterforskere anvende PCR- sekventering til at studere små prøver af DNA. Comstock / Comstock / Getty Images

I de tidlige dage af DNA-analyse, var det vigtigt for forskere og kriminalitet scene efterforskere at have store prøver af DNA for dem at have en chance for at komme med nyttigeresultater.Det var før polymerasekædereaktion (PCR) sekventering blev udviklet.PCR-sekventering tillod forskerne at forstærke genomiske regioner til analyse.Takket være PCR-sekventering, kan en retsmedicinsk forsker identificere et menneske med kun en tiendedel af en milliontedel af en liter - en 0,1 mikroliter - hans spyt.

  • Heat den ukendte DNA så dets parrede tråde adskille og de enkelte tråde kan kombinere med DNA-primere.

  • Bland DNA skabelon med magnesiumchlorid, DNA nukleotider og en stor mængde DNA-primere.Det større antal af primere sikrer de uidentificerede DNA-strenge kombinere med primere og ikke med hinanden.Afkøl reaktionsblandingen så enkeltstrenge kombineres med primeren tråde.

  • Tilføj DNA-polymerase.DNA-polymerase er et enzym, der kan læse DNA-strenge og udvide de

    m ved at koble nukleotider sammen, hvilket skaber kopier af den første prøve af uidentificerede DNA.

  • Tilføj flere DNA-primere og nukleotider og gentag cyklus.Gentag, indtil du har tilstrækkelig DNA.

Tips & amp;Advarsler

  • mængden af ​​DNA skabelon, som du har brug for at sekventere en PCR afhænger af størrelsen af ​​PCR-fragmentet.For eksempel, en skabelon på 200 til 500 basepar kræver 25 til 100 nanogram DNA-materiale.
  • Før du udfører en PCR-sekventering, bør du bekræfte der er DNA-materiale i din prøve ved hjælp af en ethidiumbromid plade test.Denne metode vil vise alle, men de mindste prøver.
  • At visualisere PCR-sekventering, placere det endelige produkt i en gelelektroforese apparat.
  • Når det er muligt, at holde koncentrationerne af uidentificerede DNA i din prøve så højt som muligt.Dette vil øge kvaliteten og pålideligheden af ​​dine PCR sekventering resultater.

Ressourcer

  • Duke University: bevarede primersekvenserne til PCR-amplifikation og sekventering
789
0
1
Andre Business & Society