Skridt til Agarosegelelektroforese

Agarosegelelektroforese er en videnskabelig procedure, der anvendes i forsknings- og diagnostiske projekter, der involverer undersøgelse af nukleinsyrer.Det tillader en videnskabsmand eller tekniker til at adskille ladet nukleinsyre-molekyler, såsom DNA, i henhold til deres størrelse, og bruges til at analysere de produkter hidrørende fra forsøg, såsom polymerasekædereaktionen.Det anvendes rutinemæssigt, fordi det er billigt at gennemføre, hurtig til at bearbejde og tillader genvinding af nukleinsyren, der analyseres.

Cast Gel

  • Saml alle nødvendige elementer og rengør dem med 70 procent ethanol.De poster omfatter gel støbning bakker, malertape, laboratorie-grade agarose, kolber eller cylindre, der kører (Tris-borat-EDTA, TBE) ved 10X koncentration, ethidiumbromid, lastning farvestof og prøve, der skal analyseres.Også sikre, at du har en gelelektroforese tank og strømkilde.Agarose fremstilles ved at afveje den passende mængde for størrelsen af ​​DNA, der skal analyseres, blande dette med TBE-buff

    er og smeltning i mikrobølgeovn.Generelt er en 1-2 procent løsning er tilstrækkelig til at dække de fleste størrelser af DNA undersøgt i rutinemæssig molekylærbiologi.Mindre DNA vil kræve mere koncentrerede geler, mens større virksomheder vil kræve mere fortyndede geler.Den agaroseopløsning blandes med ethidiumbromid, som vil binde til nukleinsyren under elektroforese procedure.Denne opløsning hældes i gelen støbebakke, et godt casting kammen indsættes, og blandingen henstår til størkning.

Belastning og Kør Gel

  • Gelen fjernes fra sin casting bakke og nedsænket i en gelelektroforese tank indeholdende løbebuffer.Prøverne, der skal analyseres, blandes med påføringsfarvestof og indlæses i brønde i gelen skabt af kammen.En markering eller stige er også inkluderet for at tillade investigator at se udviklingen i elektroforese og bestemme størrelsen af ​​fragmenter genereret senere.En elektrisk strøm påføres derefter til gelen, hvilket tvinger prøven at migrere fra den ene ende af gelen til den anden.Under denne proces nukleinsyrerne i prøven adskilles i fragmenter af forskellige størrelser, med større molekyler opholder sig tættere på brønden, og mindre molekyler bevæger sig mod den anden ende af gelen.

Analyser Gel

  • Efter elektroforese er fuldført, gelen fjernes fra tanken og anbragt på en UV-transilluminator, som lyser nukleinsyre-fragmenter, der har bundet til fluorescerende ethidiumbromid.Et fotografi af dette er taget, og de bånd af nukleinsyrer kan være dimensioneret efter afstanden migrerede gennem gelen.Stigen vil have opdelt i bånd af kendte størrelser så godt, og kan bruges til at guide investigator under analysen.

Ressourcer

  • Oxford Laboratory Teknologi: agarosegelelektroforese - Protokol
602
0
0
Andre Higher Education